總黃qu霉毒素檢測試劑盒

總黃qu霉毒素檢測試劑盒

本測試盒用間接競爭免疫分析法定量測定谷物中總黃qu霉毒素。該測試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標儀。

1 概要
黃qu霉毒素是由qu霉菌屬的黃qu霉和寄生qu霉等產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物。主要污染玉米、花生、堅果等。天然污染的黃qu霉毒素以AFB1、AFB2、AFG1、AFG2為主，總黃qu霉毒素一般指這四種毒素的總量。黃qu霉毒素屬于z強烈的天然致癌物質(zhì)，肝臟是其主要的靶器官，其中AFB1毒性z強，具有*的急性du性和致ai性。其檢測方法主要有薄層色譜法（TLC）和高效液相色譜法（HPLC），本試劑盒可以準確快速檢測糧谷類和花生及飼料中的總黃qu霉毒素。

2 測定原理
本測試盒用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，利用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入黃qu霉毒素B1標準品或樣品、總黃qu霉毒素單克隆抗體進行免疫反應(yīng)后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標記的抗鼠IgG抗體孵育，加入底物顯色，終止液終止后，用酶標儀在450nm處測定OD值。

3 提供的試劑及材料
微孔板………………………………………………………………………… 包被有AFB1-BSA
5個濃度的AFB1標準溶液各（1mL）……………………………………………直接使用
標準1：0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
標準2：1.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
標準3：2.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
標準4：5.0ng/mL    …………………………………………………………….直接使用
標準5：10.0ng/mL    ……………………………………………………….直接使用
AFS單克隆抗體溶液（6mL）……………………………………………………..直接使用
酶標物（12mL）. ……………………………………………………………………..直接使用 
顯色液（12mL）….. .….. .….. .….. .….. .….. ………………………………….........直接使用
終止液（6mL）……. .….. .….. ………………………………………………………直接使用
濃縮洗液（30mL） ...….……….….. .….. .….. ………………………………………稀釋使用
空白對照（6ml）……………………………………………………………………直接使用

4 盒中未提供，需自備物品
4.1 設(shè)備
微孔板酶標儀（含450nm）：定量分析用
振蕩器，粉碎機，微量移液器，量筒，漏斗和容量瓶，快速定性濾紙
4.2 試劑
氯化鈉（分析純）
甲醇（分析純）
去離子水或蒸餾水

5 操作者注意事項
----標準溶液中含有黃qu霉毒素，應(yīng)特別小心。
----使用過的玻璃容器及黃qu霉毒素溶液用pH7的次氯酸溶液（10%v/v）浸泡過夜。
----終止液為0.5N硫酸，避免接觸皮膚。
----不要使用過了有效日期的試劑盒。
----不要交換使用不同批號盒中的試劑。

6  儲存條件
----保存試劑盒于2-8℃。不要冷凍
----顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
----將不用的微孔板放進原錫箔袋中，置2-8℃保存。

7 試劑變質(zhì)的標志
----0ng/mL標準的吸光度值小于0.5個單位 （A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8 樣品處理 
樣品應(yīng)當保存在陰涼避光之處及冷藏保存
----取5g粉碎的有代表性的樣品，加1.25g氯化鈉及25mL70% 甲醇-水
----強力振蕩3分鐘
----用快速定性濾紙過濾
----取1mL濾液，用1%氯化鈉溶液稀釋10倍
----取50μL稀釋液進行分析
*根據(jù)需要可以增加樣品量，但甲醇溶液的量也應(yīng)相應(yīng)增加。 

9  酶標免疫分析程序
9.1注意事項
1.    每次加樣后立即將所有試劑放回2-8 ℃
3. 每步操作時間控制在5min內(nèi)。
4. 孵育過程中應(yīng)避光。

9.2 試劑稀釋
1. 濃縮洗液：使用時用去離子水或蒸餾水與本濃縮液按體積比9:1稀釋。

9.3 測定程序
1. 取所需數(shù)量的板條插入微孔架，記錄樣品及標準的位置。
2. 加入50mL標準品或處理好的樣品到微孔，每個標準和樣品必須使用新的吸頭。
3. 將50mL抗總黃qu霉毒素單克隆抗體使用液加入到每個微孔（注意移液器管尖不要接觸到放進孔中的液體，避免交叉污染），在適當位置孔加空白對照液100mL，37℃孵育90min。
4. 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
5. 每孔加入酶標物100mL，37℃孵育60min。
6. 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板3min×3次，z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
7. 每孔加入顯色液100mL（2滴），37℃孵育10 min -12min。
8. 每孔加入終止液50mL（1滴），立即用酶標儀在波長為450nm處測定吸光度值（OD值）。

10 樣品濃度計算
以標準溶液OD值與*個標準（0ng/mL）OD值的比值為縱坐標，所對應(yīng)標準溶液濃度（ng/mL）的對數(shù)值為橫坐標，制作標準曲線。根據(jù)樣品OD值與0ng/mL標準OD的比值，從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標，即為AFs濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中AFs濃度C（ng/mL），按下列公式計算出樣品中AFs含量：
AFs含量（mg/kg）= C×K
式中：C：測定液中AFs濃度（ng/mL）
            K: 測定液對樣品的稀釋倍數(shù)（本提取方法為50）

11試劑盒主要技術(shù)指標及參數(shù)
 測試盒z低檢出濃度1.0ng/mL，回收率70%-120%，交叉反應(yīng)系數(shù)小于1%，試劑盒校正曲線的線性范圍1.0ng/mL -10.0ng/mL，試劑盒條內(nèi)變異＜10%，條間變異＜15%。